HPLC का full form high-performance liquid chromatography होता है। उच्च-प्रदर्शन तरल क्रोमैटोग्राफी (एचपीएलसी) एक मिश्रण में प्रत्येक घटक को अलग करने, पहचानने और मात्रा देने के लिए एक विश्लेषणात्मक रसायन विज्ञान पद्धति है। पहले, इसे उच्च दाब द्रव क्रोमैटोग्राफी के रूप में जाना जाता था। नमूना संयोजन को स्तंभ के माध्यम से एक दबाव वाले तरल विलायक को स्थानांतरित करने के लिए पंपों का उपयोग करके एक ठोस अवशोषक सामग्री से भरे हुए स्तंभ के माध्यम से पारित किया जाता है।
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नमूने में प्रत्येक घटक adsorbent सामग्री के साथ थोड़ा अलग व्यवहार करता है, जिससे विभिन्न घटकों के लिए चर प्रवाह दर होती है और तत्वों को कॉलम से बाहर निकलने के कारण अलग हो जाता है, HPLC kya hai, HPLC ka full form kya hai in Hindi।
एचपीएलसी मुख्य रूप से विनिर्माण (जैसे जैविक और फार्मास्युटिकल सामानों के निर्माण के दौरान), कानूनी (जैसे मूत्र में प्रदर्शन-बढ़ाने वाली दवाओं का पता लगाने), और अनुसंधान (जैसे एक परिष्कृत जैविक नमूने या समान सिंथेटिक रसायनों के घटकों को अलग करने) में नियोजित किया गया है। एक दूसरे से), और चिकित्सा (जैसे रक्त सीरम में विटामिन डी के स्तर का निर्धारण) उद्देश्यों।
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क्रोमैटोग्राफी को सोखना-आधारित मास ट्रांसफर प्रक्रिया के रूप में माना जा सकता है। एचपीएलसी में, नमूना घटकों को एक दबाव वाले तरल को पंप करके और adsorbent से भरे कॉलम के माध्यम से एक नमूना संयोजन अलग किया जाता है। स्तंभ का अवशोषक, या सक्रिय घटक, आम तौर पर एक दानेदार पदार्थ होता है जिसमें 2 से 50 मीटर के आकार के ठोस कण होते हैं, जैसे सिलिका या पॉलिमर।
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नमूना मिश्रण के घटकों और सोखने वाले कणों के बीच बातचीत के विभिन्न स्तरों के कारण उन्हें एक दूसरे से अलग किया जा सकता है। दबावयुक्त तरल, जिसे “मोबाइल चरण” के रूप में भी जाना जाता है, अक्सर सॉल्वैंट्स (जैसे पानी, एसीटोनिट्राइल और मेथनॉल) का मिश्रण होता है। नमूने के घटकों और अवशोषक के बीच की बातचीत इसकी संरचना और तापमान से प्रभावित होती है, जो पृथक्करण प्रक्रिया में महत्वपूर्ण कारक हैं। ये अंतःक्रियाएं, जो आम तौर पर संयोजन होती हैं, स्वभाव से भौतिक होती हैं, जैसे हाइड्रोफोबिक (फैलाने वाला), द्विध्रुवीय-द्विध्रुवीय और आयनिक।
पारंपरिक (“कम दबाव”) तरल क्रोमैटोग्राफी की तुलना में एचपीएलसी में परिचालन दबाव काफी अधिक (50-350 बार) हैं। इसके विपरीत, पारंपरिक तरल क्रोमैटोग्राफी में, मोबाइल चरण सामान्य रूप से गुरुत्वाकर्षण बल द्वारा स्तंभ के माध्यम से पारित किया जाता है। विश्लेषणात्मक एचपीएलसी के लिए औसत स्तंभ आयाम 2.1 – 4.6 मिमी व्यास और 30 – 250 मिमी लंबाई में सीमित नमूना राशि के कारण हैं जो अलग हो गए हैं। इसके अतिरिक्त, एचपीएलसी कॉलम छोटे सोखने वाले कणों (औसत कण आकार में 2 – 50 मीटर) का उपयोग करके बनाए जाते हैं। इसने एचपीएलसी को एक व्यापक रूप से ज्ञात क्रोमैटोग्राफिक विधि बना दिया है, जिससे मिश्रण को अलग करते समय इसे उच्च संकल्प शक्ति (पदार्थों के बीच अंतर करने की क्षमता) मिलती है।
एक एचपीएलसी डिवाइस के आरेख पर एक degasser, इंजेक्टर, पंप, कॉलम, कॉलम ओवन और डिटेक्टर अक्सर दिखाए जाते हैं। सैंपलर नमूना संयोजन को मोबाइल फेज स्ट्रीम में पेश करता है और फिर इसे कॉलम में पहुंचाता है। पंप सही प्रवाह और संरचना पर स्तंभ के माध्यम से मोबाइल चरण को धक्का देते हैं। नमूना घटकों का मात्रात्मक विश्लेषण करना संभव है क्योंकि डिटेक्टर स्तंभ से आने वाले नमूना घटकों की संख्या के अनुपात में एक संकेत उत्पन्न करता है।
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एचपीएलसी तंत्र एक डिजिटल माइक्रोप्रोसेसर द्वारा नियंत्रित किया जाता है, और उपयोगकर्ता सॉफ्टवेयर डेटा विश्लेषण प्रदान करता है। कुछ एचपीएलसी उपकरण मॉडल में, यांत्रिक पंप विभिन्न सॉल्वैंट्स को अनुपात में जोड़ सकते हैं जो समय के साथ बदलते हैं, मोबाइल चरण में एक संरचना ढाल बनाते हैं। कई डिटेक्टरों का अक्सर उपयोग किया जाता है, जिनमें यूवी/विज़, फोटोडायोड एरेज़ (पीडीए) और मास स्पेक्ट्रोमेट्री-आधारित डिटेक्टर शामिल हैं। अधिकांश एचपीएलसी उपकरणों में अतिरिक्त रूप से एक कॉलम ओवन होता है जो पृथक्करण के दौरान तापमान समायोजन को सक्षम बनाता है।
प्रकार
उच्च-प्रदर्शन तरल क्रोमैटोग्राफी के अलावा, मुख्य रूप से निम्न प्रकार के क्रोमैटोग्राफी हैं:
- विभाजन क्रोमैटोग्राफी
- सामान्य-चरण क्रोमैटोग्राफी
- विस्थापन क्रोमैटोग्राफी
- उलट चरण क्रोमैटोग्राफी (RPC)
- आकार अपवर्जन वर्णलेखन
- आयन एक्सचेंज क्रोमैटोग्राफी
- बायोफिनिटी क्रोमैटोग्राफी
- जलीय सामान्य-चरण क्रोमैटोग्राफी
अनुप्रयोग
उत्पादन
एचपीएलसी के प्रयोगशाला और नैदानिक विज्ञान के क्षेत्र में कई उपयोग हैं। चूंकि यह उत्पाद की शुद्धता प्राप्त करने और सुनिश्चित करने के लिए एक विश्वसनीय तरीका है, यह फार्मास्यूटिकल्स बनाने में नियोजित एक सामान्य दृष्टिकोण है। भले ही एचपीएलसी अविश्वसनीय रूप से उच्च गुणवत्ता (शुद्धता) के उत्पाद बना सकता है, यह हमेशा थोक औषधीय सामग्री के निर्माण में नियोजित मुख्य तकनीक नहीं है। एचपीएलसी विशिष्टता, सटीकता और सटीकता में सुधार करता है, लेकिन अफसोस की बात यह है कि इससे लागत में वृद्धि भी होती है। यह देखते हुए कि एचपीएलसी बड़े पैमाने पर एक महंगी तकनीक हो सकती है, हालांकि, यह अलग-अलग समय और वित्तीय प्रतिबंधों का परिणाम हो सकता है।
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कानूनी
इस तकनीक का एक अन्य उपयोग मूत्र में अवैध दवाओं की पहचान करना है। इम्यूनोएसे दवा का पता लगाने का सबसे लोकप्रिय तरीका है। यह दृष्टिकोण काफी अधिक व्यवहार्य है। लेकिन स्पष्टता और व्यापक दवा कवरेज की कीमत पर सुविधा आती है। दवा सांद्रता का आकलन करने के लिए अकेले एचपीएलसी का उपयोग करना अपर्याप्त है क्योंकि यह शुद्धता निर्धारित करने (और शायद बढ़ाने) के लिए एक तकनीक है। इसके कारण, इस स्थिति में मास स्पेक्ट्रोमेट्री और एचपीएलसी का अक्सर उपयोग किया जाता है। एचपीएलसी के साथ संयोजन में मास स्पेक्ट्रोमेट्री का उपयोग करने पर एचपीएलसी प्रायोगिक रन के मानकीकरण की पूर्ण आवश्यकता कम हो जाती है।
शोध करना
एंटिफंगल और अस्थमा दवा उम्मीदवारों में संभावित दवा सांद्रता खोजने के लिए अनुसंधान समान तकनीकों का उपयोग कर सकता है। चूंकि इस तरह के शोध में शुद्धता महत्वपूर्ण है, इसका उपयोग संश्लेषण प्रतिक्रियाओं के परिणामों को सत्यापित करने के लिए किया जाता है। मास स्पेक्ट्रोमेट्री, हालांकि, एक नमूने के भीतर अज्ञात यौगिकों की पहचान करने के लिए एक अधिक भरोसेमंद तरीका बना हुआ है। यह विधि एकत्र किए गए नमूनों में कई यौगिकों को देखने के लिए अच्छी तरह से काम करती है, लेकिन यौगिकों की पहचान करने की कोशिश करते समय मानक समाधानों का उपयोग करना आवश्यक है।
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